Кариотипирование пренатального материала МЕТОДОМ FISH (уточняющая диагностика методом FISH при невозможности выполнения классического цитогенетического исследования)

FISH – это комбинированный молекулярно-цитогенетический метод, который состоит в гибридизации ДНК-зонда с его комплементарной последовательностью (мишенью) на хромосомных препаратах, ранее фиксированных на предметных стеклах. Показания для проведения исследования: – необходимость экспресс-диагностики (например, на поздних сроках беременности) – FISH не заменяет стандартное кариотипирование, но может проводиться в дополнение к нему, если не удалось получить препараты метафазных хромосом; FISH можно проводить непосредственно на интерфазных ядрах, что исключает трудоёмкую процедуру культивирования клеток и расширяет диагностическое применение метода для быстрого скрининга хромосомных и геномных аномалий; – подозрение на хорошо изученный конкретный микроделеционный/микродупликационный синдром; – идентификация маркерной хромосомы; – уточнение точек разрывов при хромосомных перестройках; – те же, что для кариотипирования: – высокий риск (>1:100) по результатам комбинированного пренатального скрининга первого триместра; – один или несколько пороков развития плода, не относящиеся к генному синдрому; – ультразвуковые маркеры хромосомных аномалий; – задержка внутриутробного развития; – наличие хромосомных транслокаций у родителей; – оценка воздействия тератогенных факторов (радиационных, лекарственных и т.д.); – мертворожденный ребенок с хромосомной аномалией; – возраст родителей.Мишенью может быть как ядерная ДНК метафазных хромосом, так и интерфазных клеток. Зонды метят либо непосредственно, путём включения флуоресцентных нуклеотидов, либо косвенно, путём включения молекул-репортеров, которые впоследствии обнаруживаются флуоресцентными антителами или другими аффинными молекулами. Зонды и мишени визуализируются с помощью микроскопического анализа. Зонды для FISH могут быть локус-специфическими, цельнохромосомными, субтеломерными и центромерными. Достоверность результата исследования – 99,8%. Ограничения при проведении исследования: – FISH может обнаруживать только делеции или дупликации областей, комплементарных используемому зонду; для каждого анализируемого состояния необходим подбор своих зондов; – FISH может обнаруживать только делеции или дупликации областей, которые больше, чем используемый зонд; FISH не может обнаружить редкие делеции меньше 100 kb; – неоднозначность результатов FISH в случае неэффективного связывания препарата с зондом/фонового свечения/мозаицизма.