Идентификация маркерной хромосомы методом FISH

FISH – это комбинированный молекулярно-цитогенетический метод, который состоит в гибридизации ДНК-зонда с его комплементарной последовательностью (мишенью) на хромосомных препаратах, ранее фиксированных на предметных стеклах. Мишенью может быть как ядерная ДНК метафазных хромосом, так и интерфазных клеток. Зонды метят либо непосредственно, путём включения флуоресцентных нуклеотидов, либо косвенно, путём включения молекул-репортеров, которые впоследствии обнаруживаются флуоресцентными антителами или другими аффинными молекулами. Зонды и мишени визуализируются с помощью микроскопического анализа. Зонды для FISH могут быть локус-специфическими, цельнохромосомными, субтеломерными и центромерными. Достоверность результата исследования – 99,8%. Ограничения при проведении исследования: – FISH может обнаруживать только делеции или дупликации областей, комплементарных используемому зонду; для каждого анализируемого состояния необходим подбор своих зондов; – FISH может обнаруживать только делеции или дупликации областей, которые больше, чем используемый зонд; FISH не может обнаружить редкие делеции меньше 100 kb; – неоднозначность результатов FISH в случае неэффективного связывания препарата с зондом/фонового свечения/мозаицизма.